Rede de Plataformas Tecnológicas da FIOCRUZ

RPT15A - Biologia Estrutural Integrada

ICC - Instituto Carlos Chagas /PR

A Plataforma de Biologia Estrutural Integrada tem por objetivo fornecer infraestrutura e treinamento em todas as etapas do processo de resolução e análise estrutural de proteínas, desde sua produção recombinante, caracterização biofísica em solução, cristalização até a determinação de estruturas tridimensionais. Esta plataforma está estruturada em quatro subunidades principais: 

1) Expressão de proteínas recombinantes em células eucarióticas – a implantação desta tecnologia visa disponibilizar a possibilidade de produção de proteínas complexas, multimodulares e oligoméricas para análise estrutural cuja expressão em conformação nativa não é possível em Escherichia coli ou outros sistemas bacterianos. Para estas atividades contamos com uma sala de cultivo para células eucarióticas equipada com uma incubadora de CO2 convencional (ThermoFisher), uma incubadora de CO2 com agitação (Multitron, Infors), uma cabine de segurança biológica, um microscópio invertido e um refrigerador/freezer duplex.

2) Purificação de proteínas – a plataforma está equipada com seis cromatógrafos (ex-GE Healthcare, atual Cytiva Healthcare):

- 2 cromatógrafos ÄKTA UPC 100.

- 2 cromatógrafos ÄKTA Pure M25 com válvula para quatro opções de entrada de tampões.

- 1 cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com bomba de injeção de amostras para uso com grandes volumes.

- 1 cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com válvula para quatro opções de entrada de tampões e válvula para conexão múltipla para até cinco colunas.

A plataforma também disponibiliza um conjunto limitado de colunas para cromatografia de exclusão molecular (gel-filtração).

3) Caracterização biofísica e de interações moleculares – a infraestrutura disponível possibilita a) a análise do conteúdo de estruturas secundárias e/ou análise de estabilidade por dicroísmo circular (CD); b) a análise de estabilidade e/ou estado de enovelamento por medidas de fluorescência; c) a realização de ensaios baseados em análise de luminescência (fluorescência ou quimio/bio luminescência;  d) a determinação do raio hidrodinâmico e análise do estado de agregação por espalhamento dinâmico de luz (DLS); e) a determinação simultânea do estado de oligomerização/agregação e análise de desenovelamento utilizando DLS e varredura de fluorescência (nanoDSF); f) a determinação de constante de dissociação através da técnica de termoforese em microescala.

Para estas análises contamos com os seguintes equipamentos:

- Espectrômetro de dicroísmo circular Jasco J-815

- Espectrômetro de Luminescência LS-55 (Perkin Elmer): equipamento para detecção de fluorescência e quimio/bio luminescência, que opera na faixa espectral de 200 a 800 nm para excitação e 200 a 630 nm para emissão.

- Sistema de análise de espalhamento dinâmico de luz NanoStar (Wyatt Technologies).   

- Sistema de nanoDSF/DLS Prometheus Panta (Nanotemper Technologies).

- Sistema de termoforese em microescala Monolith NT115 (Nanotemper Technologies), compatível com cromóforos com excitação/emissão em 450-495/505-575 nm (azul) e 595-645/665-730 nm (vermelho)

4) Cristalização e análise estrutural de proteínas – a plataforma tem capacidade para cristalização de proteínas incluindo testes iniciais e refinamento das condições de cristalização, análise de imagem automatizada das placas de cristalização e recursos computacionais para processamento de dados de difração e análise estrutural. Os dados de difração dos cristais são obtidos externamente, em estações experimentais de difração de raios-X de proteínas de laboratórios síncrotron.

Os equipamentos disponíveis para estas atividades são:

- Robô pipetador de volumes submicrolitro para ensaios de cristalização (Mosquito, STP Labtech).

- Robô dispensador programável para pipetagem de volumes de 0,5 μL a 4 mL para preparação das combinações matriciais de soluções para otimização de cristais (Dragonfly, STP Labtech).

- Equipamento automatizado de análise de imagens (Rock Imager 2, Formulatrix).

- Microscópio ótico convencional para observação de cristais Olympus SZX16.

- Três estações de trabalho de alta performance para processamento de dados e análise estrutural.

Serviços oferecidos

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P12-001A : Consultoria para planejamento da produção de proteínas recombinantes, caracterização biofísica e estrutural Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001B : Treinamento de usuários em expressão de proteínas em células eucarióticas Equipamento ou sistema: Expressão de proteínas recombinantes em células eucarióticas Paraná - ICC

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P12-001C : Expressão de proteínas em células eucarióticas sem acompanhamento técnico Equipamento ou sistema: Expressão de proteínas recombinantes em células eucarióticas Paraná - ICC

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P12-001D.0 : Treinamento de usuários em métodos e purificação de proteínas - ÄKTA-01: cromatógrafo ÄKTA UPC 100 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001F.0 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 75 16/600 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001H : Uso do espectrômetro de dicroísmo circular Jasco J-815 sem acompanhamento técnico - Espectrômetro de dicroísmo circular Jasco J-815 Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001G : Treinamento no uso do espectrômetro de dicroísmo circular Jasco J-815 - Espectrômetro de dicroísmo circular Jasco J-815 Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001F.1 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 75 16/600 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001F.2 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 200 16/600 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001F.3 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 200 16/600 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001F.4 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 75 Increase 10/300 GL Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001F.5 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 75 Increase 10/300 GL Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001F.6 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 200 Increase 10/300 GL Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001F.7 : Análise de proteínas por cromatografia de exclusão molecular sem acompanhamento técnico - Coluna de exclusão por tamanho • Superdex 200 Increase 10/300 GL Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001D.1 : Treinamento de usuários em métodos e purificação de proteínas - ÄKTA-02: cromatógrafo ÄKTA UPC 100 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001D.2 : Treinamento de usuários em métodos e purificação de proteínas - ÄKTA-04: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com válvula para 4 opções de entrada de tampões e válvula para conexão múltipla para até 5 colunas Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001D.3 : Treinamento de usuários em métodos e purificação de proteínas - ÄKTA-05: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com bomba de injeção de amostra Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001D.4 : Treinamento de usuários em métodos e purificação de proteínas - ÄKTA-06: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com válvula para quatro opções de entrada de tampões Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001D.5 : Treinamento de usuários em métodos e purificação de proteínas - ÄKTA-07: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com válvula para quatro opções de entrada de tampões Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001E.0 : Purificação de proteínas por cromatografia sem acompanhamento técnico - ÄKTA-01: cromatógrafo ÄKTA UPC 100 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001E.1 : Purificação de proteínas por cromatografia sem acompanhamento técnico - ÄKTA-02: cromatógrafo ÄKTA UPC 100 Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001E.2 : Purificação de proteínas por cromatografia sem acompanhamento técnico - ÄKTA-04: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com 4 opções de entrada de tampões e válvula para conexão múltipla para até 5 colunas Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001E.3 : Purificação de proteínas por cromatografia sem acompanhamento técnico - ÄKTA-05: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com bomba de injeção de amostra Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001E.4 : Purificação de proteínas por cromatografia sem acompanhamento técnico - ÄKTA-06: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com válvula para quatro opções de entrada de tampões Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001E.5 : Purificação de proteínas por cromatografia sem acompanhamento técnico - ÄKTA-07: cromatógrafo ÄKTA Pure M25 com válvula para quatro opções de entrada de tampões Equipamento ou sistema: Purificação de proteínas Paraná - ICC

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P12-001A : Consultoria para planejamento da produção de proteínas recombinantes, caracterização biofísica e estrutural Equipamento ou sistema: Expressão de proteínas recombinantes em células eucarióticas Paraná - ICC

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P12-001A : Consultoria para planejamento da produção de proteínas recombinantes, caracterização biofísica e estrutural Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001A : Consultoria para planejamento da produção de proteínas recombinantes, caracterização biofísica e estrutural Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001I : Treinamento no uso do Espectrômetro de Luminescência LS-55 (Perkin Elmer) - Espectrômetro de Luminescência LS-55 (Perkin Elmer) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001J : Uso do Espectrômetro de Luminescência LS-55 (Perkin Elmer) sem acompanhamento técnico - Espectrômetro de Luminescência LS-55 (Perkin Elmer) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001K : Treinamento no uso do sistema de nanoDSF/DLS Prometheus Panta (Nanotemper Technologies) - Sistema de nanoDSF/DLS Prometheus Panta (Nanotemper Technologies) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001L : Uso do sistema de nanoDSF/DLS Prometheus Panta (Nanotemper Technologies) sem acompanhamento técnico - Sistema de nanoDSF/DLS Prometheus Panta (Nanotemper Technologies) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001M : Treinamento no uso do sistema de termoforese em microescala Monolith NT115 (Nanotemper Technologies) - Sistema de termoforese em microescala Monolith NT115 (Nanotemper Technologies) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001N : Uso do sistema de termoforese em microescala Monolith NT115 (Nanotemper Technologies) sem acompanhamento técnico - Sistema de termoforese em microescala Monolith NT115 (Nanotemper Technologies) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001O : Treinamento no uso do sistema de análise de espalhamento dinâmico de luz NanoStar (Wyatt Technologies) - Sistema de espalhamento dinâmico de luz NanoStar (Wyatt Technologies) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001P : Uso do sistema de análise de espalhamento dinâmico de luz NanoStar (Wyatt Technologies) sem acompanhamento técnico - Sistema de espalhamento dinâmico de luz NanoStar (Wyatt Technologies) Equipamento ou sistema: Caracterização biofísica e de interações moleculares Paraná - ICC

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P12-001Q : Cristalização de proteínas: testes iniciais - Robô pipetador submicrolitro Mosquito (STP LabTech) Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001R.1 : Cristalização de proteínas: otimização - Robô dispensador Dragonfly (STP Labtech) Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001S.0 : Cristalização de proteínas: treinamento no uso dos sistemas de visualização - Sistema de análise de imagens • Rock Imager2 (Formulatrix) Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001S.1 : Cristalização de proteínas: treinamento no uso dos sistemas de visualização - Sistema de análise de imagens • Estereomicroscópio Olympus SZX16 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001T.0 : Cristalização de proteínas: uso dos sistemas de visualização sem acompanhamento técnico - Sistema de análise de imagens • Rock Imager2 (Formulatrix) Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001T.1 : Cristalização de proteínas: uso dos sistemas de visualização sem acompanhamento técnico - Sistema de análise de imagens • Estereomicroscópio Olympus SZX16 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001U.0 : Treinamento em processamento de dados de difração, refinamento e análise estrutural - Computador de alta performance • Crystal 01 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001U.1 : Treinamento em processamento de dados de difração, refinamento e análise estrutural - Computador de alta performance • Crystal 02 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001V.0 : Processamento de dados de difração, refinamento e análise estrutural sem acompanhamento técnico - Computador de alta performance • Crystal 01 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001V.1 : Processamento de dados de difração, refinamento e análise estrutural sem acompanhamento técnico - Computador de alta performance • Crystal 02 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001V.2 : Processamento de dados de difração, refinamento e análise estrutural sem acompanhamento técnico - Computador de alta performance • Crystal 03 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001U.2 : Treinamento em processamento de dados de difração, refinamento e análise estrutural - Computador de alta performance • Crystal 03 Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

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P12-001R.0 : Cristalização de proteínas: otimização - Robô pipetador submicrolitro Mosquito (STP LabTech) Equipamento ou sistema: Cristalização e análise estrutural de proteínas Paraná - ICC

Nossa Equipe

Eloise Pavão Guerra Slompo
Eloise Slompo
Responsável Técnico

Renato Ferras Penteado
Renato Penteado
Responsável Técnico

Tatiana Assunção
Tatiana Assunção
Responsável Técnico

Beatriz Gomes Guimarães
Beatriz Guimarães
Consultor

Nilson Ivo Tonin Zanchin
Nilson Zanchin
Consultor