RJ - Instituto Oswaldo Cruz
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Preparo de amostras – Digestão enzimática e dessalinização -
Na proteômica shotgun, o objetivo é identificar e quantificar proteínas a partir da análise de peptídeos gerados enzimaticamente. Para isso, as proteínas são submetidas a um preparo sistemático que garante máxima recuperação e compatibilidade com a análise posterior por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem (nLC-nESI-MS/MS). 1. Desnaturação, Redução e Alquilação As proteínas são desnaturadas para expor as cadeias polipeptídicas, reduzidas com DTT ou TCEP para quebra de pontes dissulfeto e alquiladas com iodoacetamida (IAA), evitando reoxidação. Estas etapas aumentam a eficiência e a reprodutibilidade da digestão. 2. Digestão Enzimática As proteínas linearizadas são digeridas com tripsina, que cliva após resíduos de lisina e arginina. A digestão pode ser feita em solução (in-solution), adequada para amostras complexas, ou no gel (in-gel), para identificação de bandas ou manchas proteicas específicas após eletroforese em gel. 3. Dessalinização e Concentração Os peptídeos resultantes são purificados por extração em fase sólida, removendo sais e outros contaminantes que prejudicam a ionização. Utilizam-se microcolunas empacotadas com resina Poros R2 (C8-C18), que retêm peptídeos com base na sua hidrofobicidade. Após lavagens, os peptídeos são eluídos com solventes voláteis, gerando um pool de peptídeos limpo.
Serviços oferecidos
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P02-015A : Digestão enzimática de proteínas em gel Serviços de digestão triptica de amostras proteicas, contidas em bandas ou spots de gel de poliacrilamida, revelados por Azul Brilhante de Coomassie. Este serviço pode ser realizado pelo usuário com a orientação da equipe técnica da plataforma.Você precisa clicar em “Entrar na Rede” e fazer seu login ou clicar em “cadastrar” para fazer parte da RPT. Desta forma, você poderá verificar as opções de contratação.R$ 39,41 Preço do serviço R$ 24,59 Preço especial para orgãos públicos R$ 19,67 Preço especial para unidades FIOCRUZ
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P02-022A : Digestão enzimática de proteínas em solução Serviço de digestão tríptica de amostras proteicas em solução para posterior identificação de proteínas por espectrometria de massas, utilizando a estratégia Shotgun. Este serviço pode ser realizado pelo usuário com a orientação da equipe técnica da plataforma.Você precisa clicar em “Entrar na Rede” e fazer seu login ou clicar em “cadastrar” para fazer parte da RPT. Desta forma, você poderá verificar as opções de contratação.R$ 33,79 Preço do serviço R$ 17,71 Preço especial para orgãos públicos R$ 14,16 Preço especial para unidades FIOCRUZ
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P02-023A : Dessalinização de amostras por microcolunas de fase reversa (POROS R2) O Serviço de dessalinização de amostras peptidicas utilizando microcolunas de fase reversa preparadas pela equipe da plataforma com resina POROS R2 (AppliedBiosystems). Este serviço poderá ser realizado pelo usuário, com a orientação da equipe técnica da plataforma.Você precisa clicar em “Entrar na Rede” e fazer seu login ou clicar em “cadastrar” para fazer parte da RPT. Desta forma, você poderá verificar as opções de contratação.R$ 32,81 Preço do serviço R$ 25,27 Preço especial para orgãos públicos R$ 20,22 Preço especial para unidades FIOCRUZ