PE - Instituto Aggeu Magalhães
Endereço
Professor Moraes Rego, sn - Cidade Universitária, Recife CEP: 50740465
Bioensaios para Triagem de Drogas Tripanocidas e Leishmanicidas (PlaBio Tc/L) -
A Plataforma de Bioensaios terá como missão a triagem de novos compostos tripanocidas e leishmanicidas por meio de ensaios in vitro e in vivo. Os ensaios in vitro serão realizados com cepas de Trypanosoma cruzi, Leishmania infantum (leishmaniose visceral) e L. amazonensis (leishmaniose tegumentar) transfectadas para expressar a enzima beta-galactosidase de Escherichia coli, o que possibilita a quantificação da carga parasitária por meio de ensaio colorimétrico. Já os ensaios in vivo serão realizados com os compostos que se mostrarem altamente ativos e seletivos nos ensaios in vitro supracitados. Para isso, serão utilizados camundongos Swiss Webster e BALB/c em modelos experimentais de Chagas e leishmanioses, respectivamente.
Serviços oferecidos
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P10-010A : Determinação in vitro do IC50 e LC50 sobre Trypanosoma cruzi e CC50 sobre células L929
Para a determinação da IC50, é avaliada a atividade sobre as formas amastigotas e tripomastigotas da cepa Tulahuen do Trypanosoma cruzi. São utilizados parasitas transfectados com a enzima beta-galactosidase. Essa enzima, quando em contato com o seu substrato, CPRG, promove a sua hidrólise e a consequente mudança de cor do conteúdo dos poços da placa. A mudança de cor é proporcional à quantidade de parasitas e pode ser mensurada utilizando-se um espectrofotômetro. Para a determinação da LC50, é avaliada a atividade sobre as formas tripomastigotas da cepa Y do Trypanosoma cruzi. São utilizados parasitas selvagens e é utilizado o alamarBlue, um indicador de viabilidade celular, para fazer a quantificação dos parasitas. Para a determinação da CC50, é avaliada a citotoxicidade sobre células L929 (fibroblastos murinos). Para isso, é utilizado o ensaio do MTT ((3-(4, 5-dimethylthiazolyl-2)-2, 5- diphenyltetrazolium bromide).
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P10-010B : Determinação in vitro do IC50 sobre Leishmania spp. e CC50 sobre células RAW 264.7
Para a determinação da IC50, é avaliada a atividade sobre as formas amastigotas e promastigotas de Leishmania infantum (leishmaniose visceral) e Leishmania amazonensis (leishmaniose tegumentar). São utilizados parasitas transfectados com a enzima beta-galactosidase. Essa enzima, quando em contato com o seu substrato, CPRG, promove a sua hidrólise e a consequente mudança de cor do conteúdo dos poços da placa. A mudança de cor é proporcional à quantidade de parasitas e pode ser mensurada utilizando-se um espectrofotômetro. Para a determinação da CC50, é avaliada a citotoxicidade sobre células RAW 264.7 (macrófagos murinos). Para isso, é utilizado o ensaio do MTT ((3-(4, 5-dimethylthiazolyl-2)-2, 5- diphenyltetrazolium bromide).
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P10-010C : Ensaios de atividade anti-Trypanosoma cruzi in vivo
Serão testados in vivo os compostos tripanocidas que apresentarem um Índice de Seletividade ≥ 50. Essas amostras serão testadas utilizando-se camundongos Swiss Webster como modelos experimentais, obedecendo ao fluxograma proposto pela FIOCRUZ/DNDi. Inicialmente será utilizada a cepa Y de Trypanosoma cruzi. Posteriormente será utilizada a cepa Colombiana se nos ensaios com a cepa Y a atividade do composto testado for próxima à conferida pelo benzonidazol.
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P10-010D : Ensaios de atividade anti-Leishmania spp. in vivo
Serão testados in vivo os compostos leishmanicidas que apresentarem um Índice de Seletividade ≥ 20. Essas amostras serão testadas utilizando-se camundongos BALB/c como modelos experimentais. Serão realizados ensaios com cepas de Leishmania spp. que promovem as leishmanioses visceral e tegumentar. Glucantime ou miltefosina serão utilizados como drogas de referência.
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P10-010E : Ensaios de imunomodulação para avaliação de mediadores (óxido nítrico e citocinas dos perfis Th1, Th2 e Th17)
As citocinas produzidas por macrófagos murinos imortalizados, após estímulo com compostos tripanocidas ou leishmanicidas, serão quantificadas utilizando-se o sistema Cytometric Bead Array (CBA) (Kit CBA Camundongo -citocinas Th1/Th2/Th17), Becton Dickinson-BD, de acordo com as instruções do fabricante, com posterior leitura em citômetro de fluxo e análise pelo programa FCAP Array v3 (BD Biosciences). O óxido nítrico será quantificado por meio da reação colorimétrica de Griess.
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